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Tesis de maestría
Lina Angélica Zermeño Cervantes
Sergio Francisco Martínez Díaz y Héctor Gerardo Nolasco Soria
Maestría en Ciencias en Manejo de Recursos Marinos
26/06/2012
2012
Inducción de susceptibilidad a endolisinas mediante la permeabilización de la membrana externa de bacterias gram-negativas

En el presente trabajo se evaluó el efecto bactericida de lisados crudos de fagos que infectan bacterias Gram-negativas en conjunto con agentes permeabilizadores de membrana, bajo la hipótesis de que la desestabilización de la membrana externa provocaría que las endolisinas contenidas en los lisados crudos logren el acceso a la pared celular y la destruyan, lo que provocaría la pérdida de viabilidad de las bacterias. Para ello se utilizaron como modelo de estudio diferentes cepas del género Vibrio, entre las que se encontraba V.

parahaemolyticus (ATCC-17802) y tres cepas aisladas de diferentes fuentes marinas, a las cuales se corroboró su pertenencia a este género mediante la secuenciación parcial del gen 16S. Se implementaron evaluaciones indirectas para corroborar que los fagos seleccionados fueran poseedores de un sistema enzimático de lisis y que su ciclo de replicación fuera lítico. Se implementó un procedimiento para la evaluación de la actividad de las endolisinas a partir de lisados crudos y se estandarizó un protocolo para la producción de lisados con altas concentraciones de enzimas. Las mejores condiciones para la producción de lisados crudos fueron: temperatura de incubación (25-30°C), condición normal de oxigenación (en presencia de aire), agitación constante y la multiplicidad de infección (MDI = 5). La actividad enzimática de los lisados crudos producidos fue  evidenciada utilizando como sustrato células de Vibrio previamente sensibilizadas. Se encontró que el efecto bacteriolítico de los lisados crudos estudiados son de amplio espectro ya que su actividad no se restringió a su cepa blanco. Se evaluó el efecto bactericida del lisado crudo del fago Vpms1 sobre células viables de Vibrio parahaemolyticus. Se encontró que el lisado crudo libre de fagos en conjunto con una dosis no bactericida de aceite de L. berlanideri logró reducir más del 50% la cuenta de células viables de una suspensión de V. parahaemolyticus de 109 UFC mL-1 lo que demostró que la aplicación de las endolisinas no está limitada a bacterias Gram-positivas como ha sido sugerido hasta ahora, sino que las bacterias Gram-negativas son susceptibles al efecto bactericida de las  endolisinas cuando la membrana externa es permeabilizada.

Microbiología, Endolisinas, Bacterias, Gram-Negativas
xi, 121 h.
1 en físico
QR1201 Z47 2012

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