Tesis de maestría

Felipe Neri Melo López

Cesar Salvador Cardona Felix y Ruth Noemí Águila Ramírez

Maestría en Ciencias en Manejo de Recursos Marinos

2022

Evaluación de la actividad bactericida de la endolisina MV-L del fago phiMR11 contra Staphylococcus aureus resistente a meticilina

El uso indiscriminado de los antibióticos ha provocado la aparición de cepas de Staphylococcus aureus resistente a meticilina (SARM). Este microorganismo es considerado por diversas organizaciones intergubernamentales, como la Organización Mundial de la Salud (OMS) y los Centros para el Control y Prevención de Enfermedades (CDC), como un patógeno de elevada prioridad para la investigación y desarrollo de nuevos antibacterianos que ayuden a combatirlo. Lo anterior debido a que las enfermedades que causa aumentan los costos de tratamiento, de hospitalización y la tasa de mortalidad en comparación con cepas no resistentes. En este sentido, las endolisinas (enzimas líticas derivadas de bacteriófagos) han recibido una gran atención por su potente actividad bactericida, alta especificidad y baja generación de resistencia. El objetivo de este trabajo es producir, haciendo uso de la tecnología del ADN recombinante, la endolisina MV-L del fago phiMR11 y determinar el rango de condiciones en las que presenta actividad contra SARM. En primera instancia, se realizó la predicción de su estructura e identificación de dominios funcionales mediante análisis in silico. Posteriormente, se llevó a cabo la clonación del gen codificante de esta endolisina en el vector de expresión pColdI, empleando como sistema de propagación una cepa de Escherichia coli genotipo DH5a. A continuación, se utilizó la cepa de E. coli genotipo BL21 (DE3) como sistema de expresión y posteriormente se purificó la endolisina. Una vez obtenida, se evaluó su actividad bajo diferentes condiciones bioquímicas a través de ensayos de reducción de la densidad óptica de una suspensión de SARM. Al analizar los datos cinéticos, se determinó que la endolisina posee actividad bactericida bajo un amplio rango de pH (7-11), fuerza iónica (NaCl 0-1 M) y temperatura (20-42 °C), requiere de Zn2+ para su funcionamiento y el Ca2+ lo potencia, aumentando la actividad casi 32 veces bajo condiciones óptimas. La determinación del rango de condiciones en las que la endolisina MV-L posee actividad bactericida, así como la potente actividad que presenta contra SARM, la coloca como una buena propuesta para su utilización en diferentes ámbitos. 

Antibiótico, Bacteria resistente, Bacteriófago, Endolisina, ADN

x, 74 h.

Disponible solo en versión digital

QR1201 M45 2022

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