Resumen del producto

El género Chattonella tiene la dificultad de ser identificado a nivel de especie y cuantificado bajo microscopía de luz, ya que carece de una estructura rígida que proteja a las células de los métodos tradicionales de recolecta y preservación. Por esta razón se desarrollaron sondas moleculares que permiten la identificación y cuantificación de cepas de Chattonella mediante FISH. Se diseñaron sondas de Chattonella subsalsa y Chattonella marina a partir de secuencias de la región 5.8S, ITS y 18S del ARN ribosomal, se utilizó paraformaldehído 1% para fijar las células y se probaron distintas temperaturas de hibridación y lavado. Las sondas diseñadas de la región ITS y 18S para C. subsalsa fueron específicas para la especie, ya que no hubo hibridación con otros grupos de microalgas analizadas, las temperaturas de hibridación y lavado óptimas fueron de 40 y 45°C respectivamente. La fluorescencia emitida por la hibridación no fue intensa debido a la autoflorescencia de la clorofila y por el gran número de cloroplastos que contienen las células. Para C. marina no se logró la hibridación con ninguna de las sondas y temperaturas analizadas. El diseño de sondas moleculares es un recurso que facilita la identificación de especies, para el caso de C. subsalsa resulta útil para poder diferenciarla de C. marina. Es necesario desarrollar un método en que la fluorescencia emitida por la hibridación sea mayor que la emitida por la autofluorescencia de la clorofila.

Palabras clave: Chattonella; hibridación; ARN ribosomal; sonda molecular; cuantificación.

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