Resumen del producto

La tuberculosis es una enfermedad contagiosa, crónica y mortal presente en todo el mundo, causada principalmente por el bacilo Mycobacterium tuberculosis. Debido al desarrollo de cepas resistentes a los fármacos convencionales y la co-infección con virus de inmunodeficiencia adquirida, es urgente la búsqueda de nuevos agentes antituberculosos. El presente trabajo reporta la actividad de compuestos y fracciones obtenidas del extracto etanólico de dos especímenes con distinta fecha de recolecta del alga Sargassum horridum contra M. tuberculosis. Las algas se colectaron en el poblado de San Juan de la Costa, Baja California Sur, México, en mayo de 2004 (Sh-04-003) y junio del 2006 (Sh-06-009). Ambos especímenes se limpiaron, secaron y se extrajeron vía maceración con 100% de etanol (EtOH). Los extractos obtenidos se concentraron a sequedad en rotavapor a 40°C. El extracto EtOH de Sh-04-003 se sometió a extracción sólido-líquido absorbiendo el extracto en sílica gel fase normal y se eluyó en un filtro de porcelana usando 0.4 L de mezclas de diclorometano (DCM): EtOH aumentando la polaridad de la mezcla con el objetivo separar los compuestos en grupos. La fracción eluída con DCM al 100% se fraccionó mediante cromatografía en columna (CC) fase normal y CC fase reversa. El extracto EtOH Sh-06-009 se disolvió en DCM, se filtró (2X) y concentró a sequedad. Posteriormente se sometió a CC, usando sílica gel como fase estacionaria y mezclas de DCM: EtOH de polaridad ascendente como fase móvil, obteniendo 19 fracciones primarias (F1-F19). Posteriormente F8 se sometió a una CC con sílica gel y mezclas de hexano(HEX): acetona de polaridad ascendente que generó 13 fracciones secundarias (F8:1-F8:13). Las separación se monitoreó por cromatografía en capa fina (CCF) en sílica, HEX: acetona 8:2 como eluyente y revelado con H₂SO₄ 10%. Para evidenciar la presencia de quinonas y antraquinonas se revelaron las placas de CCF con KOH al 5% y 10% en EtOH, respectivamente, mientras que para naftoquinonas se utilizó KOH al 10% en MeOH. Los componentes presentes en las fracciones bioactivas se separaron e identificaron mediante nano-cromatografía líquida, acoplado a un espectrómetro de masas (EM) híbrido con una configuración cuadrupolo-tiempo de vuelo Qtof Premier, en modo de ionización negativa. Además estas fracciones se analizaron mediante cromatografía de gases (CG) con detector de ionización de flama, previa derivatización a ésteres volátiles, mediante comparación de una mezcla de estándares de ésteres metílicos de ácidos grasos. Los compuestos puros se identificaron mediante espectrometría de infrarrojo, resonancia magnética nuclear de protón y de carbón. Todos los productos obtenidos fueron evaluados por el método de azul de Alamar en microplaca utilizando la cepa de referencia M. tuberculosis H37Rv ATCC 27294 (sensible a estreptomicina, isoniazida, rifampicina, etambutol y pirazinamida). Nuestros resultados mostraron que el extracto del año 2004 Sh-04-003 exhibió una concentración mínima inhibitoria (CMI) de 6.25 mg mL^-1, su fraccionamiento permitió el aislamiento de manitol, fucosterol y ácido mirístico, de los cuales solo el último resultó activo (CMI = 50 mg mL^-1). El resto de las fracciones, incluyendo las mayoritarias no resultaron bioactivas. En contraste el espécimen colectado en 2006 Sh-06-009 resultó menos activo (CMI = 100 mg mL^-1) y la actividad se concentró en la fracción secundaria (F8:5, CMI = 25 mg mL^-1). Desde Sh-06-009 se aislaron nuevamente manitol y un compuesto que se caracterizó parcialmente como un glucoglicerolípido. La CG identificó una mezcla de ácidos grasos (láurico, mirístico, palmítico, esteárico y oleico) como componentes principales de las fracciones bioactivas, lo cual es consistente con los reportes previos de actividad contra la M. tuberculosis del ácido láurico, misrístico y oleico. Reportes científico previos informan que la actividad antituberculosa de otras especies de Sargassum se atribuían al fitoesterol saringosterol; también se han reportado compuestos de tipo quinólico con actividad antibacteriana. El análisis de las fracciones activas de S. horridum mediante CCF y la EM descartan su presencia. Considerando lo anterior podemos inferir que el fraccionamiento realizado a la fracción no polar 06-009 extrajo mayoritariamente los ácidos grasos láurico, mirísitico y oleico, y que estos exhiben un efecto sin o aditivo de actividad sobre M tuberculosis. Asimismo, concluimos que la diferencia entre la actividad observada de los extractos crudos de S. horridum es debida a la concetración de ácidos grasos en el alga al momento de su recolecta.

Palabras clave: Sargassum; seaweed; Tuberculosis; Mycobacteria; esteroles

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